1 細胞系開發(fā)的工作流程
概述
隨著許多研究機構(gòu)對生成和優(yōu)化細胞株的需要以及生物制藥市場的快速增長,細胞系開發(fā)變得越來越重要。
生成和優(yōu)化細胞系是非常重要的,因為這樣可以盡早縮短藥物的上市時間,因此在減少成本和增加利潤上有著重要的意義。
盡管最近細胞系發(fā)展(包括儀器和目標基因整合的策略),仍然有需求和空間來進一步提高某一個階段的工藝,其中重要的一個環(huán)節(jié)就是改善上游工藝的開發(fā)。需求如下:
●進一步減少克隆挑選和放大的時間
●更好的成像質(zhì)量和記錄
●更高效價的克隆
●從轉(zhuǎn)染池到克隆挑選縮短15周的時間
所有的上述需求都可以通過Cell Metric這樣的儀器管理工作流程,減少上游細胞系開發(fā)的步驟。
工作流程
細胞系的開發(fā)始于大批量的轉(zhuǎn)染細胞,(典型的CHO-S,下一步便是分離高表達量的重組蛋白。)
挑出高表達量的克隆有很多種方法,其中之一就是熒光標記的細胞分選(FACS), 通過這種方法,熒光抗體與重組蛋白相結(jié)合,帶有大量熒光信號的細胞會分配到微孔板的每一個孔中來進行下一步的實驗。
Solentim 新推出的Cell Metric儀器,提供給我們一個確定細胞系單克隆性的可選方案。對每個孔板的單個細胞克隆接種都有高清的圖像,在天單個細胞就可以清晰的鑒別出并且記錄,然后可以監(jiān)測細胞株的形成。定期記錄在細胞增殖過程中每個孔板中的成像。
Figure: 接種數(shù)天后的懸浮細胞團
Figure:細胞系開發(fā)的工作流程
2 克隆篩選
在克隆篩選方面,高質(zhì)量的成像可以幫助實驗者盡早確定單克隆并且簡化工作流程。Cell Metric可以自動的進行克隆篩選,并且儲存一個清晰的高質(zhì)量的孔板圖片最終幫助您確定孔板中的細胞是否為單克隆。
Figure: 孔板邊緣的細胞也可以清晰的看到
Figure:接種后的單細胞圖片較早的提供了單克隆的證據(jù)
Figure:生成為觀察細胞增殖和融合的生長曲線
3 產(chǎn)品
細胞系的開發(fā)在過去五年中已經(jīng)歷了從手動成像到自動成像的過程,與此同時,越來越多的客戶要求保留照片作為單克隆的證據(jù)。
為了克服現(xiàn)有的局限性并優(yōu)化流程。 第二代的成像系統(tǒng)Cell Metric™ 已經(jīng)被用于世界前沿的細胞系開發(fā)過程中。
使用Cell Metric,細胞可以在常規(guī)的培養(yǎng)基環(huán)境中進行整板成像。包括帶蓋子的平底平板(384,96,24,6孔)。 Cell Metric可以自動或者手動將板子推到儀器中,快速的進行整孔成像。實驗結(jié)果可以在電腦上或者通過遠程觀察軟件觀察, 得到數(shù)據(jù)包括細胞計數(shù),菌落計數(shù),細胞聚集和生長曲線,這樣就可以很容易分析每個孔的圖像,進而對感興趣目標孔進行深度研究。另外Cell Metric還可以實時追蹤并以圖像的形式記錄數(shù)據(jù),幫助您追蹤單細胞的克隆生長率,優(yōu)化您的工作流程。
Figure:Cell Metric -克隆篩選系統(tǒng)
Figure:Cell Metric CLD-專為細胞系開發(fā)的克隆篩選系統(tǒng)
Figure:Cell Metric 的軟件可以給到孔板中的細胞分布情況
Figure:Cell Metric 可以成像貼壁細胞和懸浮細胞
Cell Metric 特征
Features of Cell Metric series | Benefits |
單細胞分辨率圖像 | 分液到孔板后,可以從第0天觀察,在細胞系開發(fā)的過程中可以省去數(shù)周的亞克隆時間 |
在微孔板中觀察細胞 | 準確的細胞數(shù)量計算 避免了吸液的誤差,直接可視讀取,對于細胞無傷害 |
無傷害,無污染,無標記或者染色。 | 無限定細胞的個數(shù),可以連續(xù)測量整個孔板內(nèi)的細胞數(shù)量 沒有熒光標記,對于臨床和治療性的研究有幫助 |
每塊板子讀取時間<3分鐘 | 比起手動顯微鏡方式,更加快速和準確。 整個孔板掃描,連續(xù)性更好。 |
自動聚焦孔板的每一個孔 | 連續(xù)性好,沒有任何孔的漏掃。 |
均勻照明孔板,孔板周圍也很清晰。 | 高清晰度的成像,孔板邊緣無陰影和光圈,而細胞經(jīng)常容易聚集在孔板邊上。 |
系統(tǒng)與所有的SBS系列的板子相容 | 整個流程使用起來方便靈活 |
數(shù)據(jù)記錄細胞 | 是審計追蹤的證據(jù) |
Cell Metric 系列型號特征
| Cell Metric™ | Cell Metric™ CLD | Cell Metric™ rapid | |
成像速度 | 小于三分鐘/塊板子 | 小于三分鐘/塊板子 | 45秒鐘/塊板子 | |
分辨率 | 2 μm 每像素 | 2 μm 每像素 | 2.7 μm 每像素 | |
能否整孔成像 | 是的 | |||
細胞類型 | 液體培養(yǎng)基中的貼壁或者懸浮細胞 | |||
孔板類型 | 平底,蓋有蓋子的 SBS 標準孔板: 6, 12, 24, 48, 96, 384, 1536 wells 方形瓶(plate stacker模式不支持): T-25, T-75 (需要額外適配器), Corning RoboFlasks | |||
成像系統(tǒng) | 明場成像 | |||
是否有溫控stacker | 沒有 | 有(10塊板子) | 不適用 | |
能否條碼讀取 | 可以 | |||
尺寸(WxDxH) | 485 x 465 x 325mm 19.1 x 18.3 x 12.8” | 650 x 465 x 500 mm | 485 x 465 x 325mm 19.1 x 18.3 x 12.8” | |
重量 | 33 kg, 73 lbs | 50 kg, 110 lbs | 33 kg, 73 lbs | |
部件號碼 | CC 1000 | CC 1060 | CC 1020 | |
機械臂的軟件接口 | 有 | 無 | 有 |