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RNA(液體熒光型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)其他

所  在  地北京市

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更新時間:2025-01-06 21:24:18瀏覽次數(shù):39次

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商鋪產(chǎn)品:87條

所在地區(qū):北京北京市

聯(lián)系人:張經(jīng)理

產(chǎn)品簡介

(貨號:WLRE5003)原理概述:本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈,反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)

詳細(xì)介紹

RNA(液體熒光型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒 (貨號:WLRE5003

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈,反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)。本試劑盒在42 oC下,依賴核酸外切酶的作用,加入根據(jù)模版設(shè)計的特異的分子探針,使用熒光監(jiān)測設(shè)備能實現(xiàn)對目標(biāo)片段擴(kuò)增過程的實時監(jiān)控。適用于實驗室級別的RNA擴(kuò)增以及其他檢測用途的RNA擴(kuò)增使用。

引物設(shè)計:

建議使用長度在30-35 bp的引物,引物過短會影響擴(kuò)增速度和檢測靈敏度;引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò)增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

熒光探針設(shè)計:

探針序列不與特異性引物識別位點重疊,長度為46-52 nt,序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個修飾位點:距離5’端的≥35 nt的中部位置標(biāo)記一個dSpacer(四氫呋喃,THF),作為核酸外切酶的識別位點;THF位點的上游標(biāo)記一個熒光基團(tuán),下游標(biāo)記一個粹滅基團(tuán),兩個基團(tuán)的間距為2-4 nt;THF距離3’末端≥15 nt,并且3’末端標(biāo)記一個修飾基團(tuán),例如胺基、磷酸基團(tuán)或C3-Spacer。

試劑盒組成:

100T/盒

組成 含量
C buffer 1 mL×2管
L buffer 500 μL×1管
P-core 1.2 mL×1管
E-core 60 μL×1管
B buffer 300 μL×1管
使用說明書 1份

試劑盒儲存:

運輸條件:低溫運輸;

儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復(fù)凍融;

操作步驟:提前將試劑盒所需組分取出,冰上或低溫下融化(C buffer可室溫融化),震蕩混勻。

1) 向無菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer;

2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針,再加入1.5μL dNTPs(10 mM);

3) 向反應(yīng)管中加入12 μL P-core和0.6 μL E-core,(步驟1~3可以混合后再分裝至反應(yīng)管中);

4) 向反應(yīng)管中加入3.8 μL核酸模板;

5) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(加入B buffer反應(yīng)立即被啟動);混勻后,將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應(yīng)管放入熒光檢測設(shè)備中。熒光檢測程序設(shè)置為:恒溫42 oC;每30 s采集一次熒光信號;反應(yīng)時間20 mins。

注:如使用ABI系列PCR儀,請務(wù)必于passive referencequencher處均選擇“none"。

體系配制

組分 體積(μL)
C buffer 20

5

L buffer
P-core 12
E-core 0.6
dNTPs(10 mM) 1.5
下游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
探針(10 μM) 0.6
DNA模板 3.8
B buffer 2.5
總體積 50

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

N:陰性對照; P:正對照

注意事項:

  • 為保證液體試劑組分活性,請保證儲存溫度 ≤ -20 oC;試劑使用時請保持低溫,避免高溫放置過長時間;
  • 在進(jìn)行反應(yīng)時請注意避免微量核酸染,并設(shè)置空白對照實驗組。

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